FITC Phalloidin 是一种常用的荧光标记试剂，由荧光素异硫氰酸酯（FITC）与鬼笔环肽（Phalloidin）结合而成，广泛应用于细胞生物学和生物学研究中陕西股票配资公司，用于特异性标记和可视化细胞内的肌动蛋白丝（F-actin）。
一、组成与结构
FITC（荧光素异硫氰酸酯）：一种绿色荧光染料，激发波长约为495 nm，发射波长约为519 nm，具有高荧光量子产率和良好的光稳定性。
鬼笔环肽（Phalloidin）：一种从毒蘑菇中提取的环状七肽，能够以高亲和力特异性结合肌动蛋白丝（F-actin），而不与肌动蛋白单体（G-actin）结合。
二、作用机制
特异性结合：FITC Phalloidin 通过鬼笔环肽部分与肌动蛋白丝结合，FITC 荧光染料部分提供可视化信号。
稳定肌动蛋白丝：鬼笔环肽的结合可以稳定肌动蛋白丝，防止其解聚，从而在固定细胞中保持肌动蛋白丝的完整结构。
三、应用领域
1.细胞骨架成像：
展开剩余70%用于荧光显微镜观察细胞内肌动蛋白丝的分布和动态变化。
适用于固定细胞和活细胞成像（需优化条件）。
2.细胞生物学研究：
研究细胞迁移、细胞分裂、细胞形态变化等过程中肌动蛋白丝的作用。
用于分析药物或毒素对细胞骨架的影响。
3.高内涵筛选（HCS）：
在药物研发中，用于高通量筛选影响细胞骨架的药物。
4.免疫荧光染色：
与其他荧光标记的抗体或探针结合，用于多色荧光成像。
四、使用方法
1.细胞固定与通透：
通常需要先用甲醛或多聚甲醛固定细胞，再用 Triton X-100 等通透剂处理细胞膜，使 FITC Phalloidin 能够进入细胞与肌动蛋白丝结合。
2.染色步骤：
将 FITC Phalloidin 稀释至适当浓度（通常为 5-20 μg/mL），加入到细胞中，室温孵育 20-60 分钟。
洗涤后，用荧光显微镜观察。
3注意事项：
FITC Phalloidin 具有毒性，操作时需佩戴手套和防护眼镜。
避免光照，因为 FITC 对光敏感，长时间暴露会导致荧光淬灭。
五、优势
高特异性：仅与肌动蛋白丝结合，不与肌动蛋白单体结合。
高荧光信号：FITC 提供明亮的绿色荧光，适用于多种荧光显微镜。
稳定性好：结合后的肌动蛋白丝在固定细胞中保持稳定，便于长时间观察。
六、替代品
罗丹明标记的鬼笔环肽（TRITC Phalloidin）：发射红色荧光，适用于多色荧光成像。
Alexa Fluor 系列标记的鬼笔环肽：如 Alexa Fluor 488 Phalloidin、Alexa Fluor 555 Phalloidin，具有更高的光稳定性和荧光亮度。
SiR-Actin：一种硅罗丹明标记的肌动蛋白探针，适用于活细胞成像。
以上由陕西新研博美WWH编辑陕西股票配资公司
发布于：陕西省博牛配资提示：文章来自网络，不代表本站观点。
相关文章
热点资讯
